MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO OPTIKA B-500 TDK

El modelo B-500DK es un equipo para la observación de muestras en campo oscuro como el análIsis de sangre, con un condensador de campo oscuro especial y gran eficiencia de 1,36 – 1,25 A.N. y un objetivo plan acromático de 100x con diafragma iris ajustable.

En el condensador se encuentra la iluminación X-LED (exclusiva de Optika) la cual garantiza un alto nivel de intensidad de luz necesaria para la técnica de campo oscuro a grandes aumentos.

Para trabajar correctamente con el microscopio, es necesario un mínimo de conocientos sobre: a) técnica de aceite de inmersión y b) técnica de campo oscuro.

En este y los siguientes artículos se presentan los conceptos básicos de estos métodos y a continuación le damos una guía paso a paso para la configuración del B-500 TDK.  Así como algunos consejos generales para la microscopía de inmersión.

La capacidad de un objetivo para capturar los rayos de luz desviados de un espécimen depende tanto de la apertura numérica y el medio a través del cual viaja la luz.

La apertura numérica (A.N.) de un objetivo es directamente proporcional al índice de refracción de la imagen entre el cubreobjetos y la lente frontal, y el seno (trigonometria) de la mitad de la abertura angular del objetivo. Debido a que el seno no puede ser mayor que 90 grados , la apertura numérica máxima posible se determina por el índice de refracción del medio de inmersión. La mayoría de los objetivos de microscopio utilizan el aire como el medio a través del cual los rayos de luz tienen que pasar entre el cubre-objetos (protector de la muestra) y la lente frontal del objetivo. Los objetivos de este tipo se denominan “objetivos en seco” ya que no utilizan ningún medio líquido. El aire tiene un índice de refracción de 1,0003 , muy próxima a la de vacío y considerablemente más baja que la mayoría de los líquidos , incluyendo el agua ( n = 1,33 ) , glicerina ( n = 1.470 ) y de aceites de inmersión comunes ( promedio de n = 1,515 ) . En la práctica, la abertura máxima numérica de un objetivo seco está limitado a 0,95, y solo se puede conseguir valores mayores utilizando óptica diseñada para trabajar en medios de inmersión (como el aceite para microscopia).

INTRODUCCIÓN A LA MICROSCOPÍA CON ACEITE DE INMERSIÓN

Aceite de inmersión y apertura numérica
Aceite de inmersión y apertura numérica

El principio de inmersión en aceite se demuestra en la Figura 1 donde los rayos de luz individuales se trazan a través de la muestra y, o bien pasan hacia el objetivo o se refractan en otras direcciones. La Figura 1 ( a) ilustra el caso de un objetivo en seco con cinco rayos ( etiquetados 1 a 5 ) aparecen pasando a través de una muestra con cubre-objetos sólo los dos rayos más cercanos al eje óptico ( rayos 1 y 2 ) del microscopio tienen el ángulo apropiado para entrar en la lente frontal del objetivo . El tercer rayo se refracta en un ángulo de aproximadamente 30 grados al cubre-objetos y no entra en el objetivo . Los dos últimos rayos ( 4 y 5 ) se re ejan internamente de vuelta a través del cubre-objetos y , junto con el tercer rayo , contribuyen a las reflexiones internas de la luz en las super cies de vidrio y tienden a degradar la imagen. Cuando el aire se sustituye por el aceite del mismo índice de refracción que el vidrio, tal y como se muestra en la Figura 1 ( b ) , los rayos de luz ahora pasan directamente a través del cubre-objeto, y no hay refracción. La apertura numérica es incrementada en el factor de n= el índice de refracción del aceite.

Los objetivos diseñados para trabajar con aceite de inmersión tienen más ventajas que los objetivos en seco. Los de inmersión són típicamente de corrección más elevada (ya sean de fluorita o apocromático) y pueden trabajar con aperturas numéricas de hasta 1,40 A.N. cuando la dispersión y viscosidad del aceite son adecuados. Estos objetivos permiten abrir en mayor grado el diafragma del condensador, extendiéndo así la iluminación a través de la muestra y aprovecharse de una mayor apertura numérica.

Un factor que normalmente se pasa por alto cuando se utiliza objetivos de inmersión en aceite y por lo tanto de una mayor apertura numérica son las limitaciones impuestas al sistema por la lente condensadora. En una situación en la que un objetivo de aceite de A.N. = 1,40 se está utilizando un condensador con la apertura numérica más pequeña (por ejemplo de A.N. = 1,0), la apertura numérica del condensador prevalece sobre la del objetivo y la A.N. total está limitada a 1,0.

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